原标题：2021上海新冠核酸PCR证书试题（第三套）
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一、选择题（每题2分）1. 分子诊断定量检测项目室内质控如果出现下列哪种失控规则可考虑随机误差：（ C ）A. 41s B. 22s C.R4s D.10x2. 使用PCR技术检测新冠核酸病毒时，PCR体系所必需的组分是：（ C ） ①模板 ②引物 ③四种脱氧核苷酸 ④DNA聚合酶 ⑤16sRNA ⑥反转录酶A.12345 B.23456 C.12346 D.134563. 在PCR检测中，分析前的质量影响因素包括（ D ） A.标本采集室间 B. 标本运送时间 C.标本保存时间和温度 D.以上全是4.清洁PCR仪的反应槽、热盖及生物安全柜等仪器时，最好使用（ C ） A.1N盐酸 B.1%次氯酸钠 C.75%乙醇 D. 0.2%次氯酸钠5. 在临床基因扩增检验中，弱阳性室内质控品发生失控，常见原因有下述各项，但除外（D） A.核酸提取中的丢失、有机溶剂的去除不彻底、标本扩增抑制物的残留等 B.扩增仪孔间温度的不均一性 C.Taq酶和/或反转录酶的失活 D.扩增产物的污染6. 在临床基因扩增检验实验室中，影响结果正确与否的重要因素，除了试剂盒质量外，其他还有（D ）A.人员素质 B.仪器设备状态 C.室内指控措施 D.以上全是7. 在PCR中TaqDNA聚合酶与靶核酸的结合发生于下述过程中的哪一阶段（C ） A.变性 B.退火 C.延伸 D.以上都有8. 在一个DNA分子中，如G多占摩尔比为17.2%，则A所占摩尔比为：（ B ） A.82.8% B.32.8% C.17.2% D.65.6%9. 如果一个PCR反应体系中加入模板200个，经过30个循环后，理论上扩增产物的数量将达到：（ C ） A.200?30?2 B.2002?30 C.200?230 D.200?30210. 新冠病毒核酸检测过程中为最大限度监控实验室假阳性结果，阴性室内质控建议：（ D ）A.建议每批检测设立1个阴性质控B.建议每批检测设立2个阴性质控，二份阴性质控固定C.建议每批检测设立3个阴性质控，三份阴性质控固定D.建议每批检测设立3个阴性质控，三份阴性质控随机放在临床样本中间，与待检测样本同时参与全过程检测11.荧光定量PCR检测过程中，基线漂移的可能原因有：（D ） A.蒸发 B.探针水解 C.相邻荧光通道干扰 D.以上都是12.核酸分子中储存遗传信息的关键部分时：（D ） A.mRNA B.tRNA C.rRNA D.DNA13.实时荧光RT-PCR检测新型冠状病毒2个靶标（ORFlab和N基因），阳性结果判断错误的是：（B） A.同一份标本中检测结果均为阳性，判定为阳性 B.同一份标本单个靶标阳性后对该样本重复检测，如果仍为单靶标阳性，判定为阳性 C.两种标本同时出现单靶标阳性，可判定为阳性 D.两种类型标本两次采样检测中均出现单个靶标阳性的检测结果，可判定为阳性14.新冠病毒河段检测样本送检：（ D ） A.样本采集后室温放置不超过4h B.应按照《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定》（原卫生部令第45号）办理《准运证书》 C.样本应单独转运，不能和其他物品混杂 D.以上都对15.一下哪些有利于DNA的保存：（ A ） A.加入EDTA螯合钙离子，去除核酸酶的活性 B.加入少量DNase C.溶于pH3.0的溶液中 D.加入少量RNase16.PCR扩增检测采用内标，可以识别扩增检测的：（C ） A.假阴性 B.假阳性 C.假阴性、假阳性都可以预防 D.假阴性、假阳性都不能预防 17.在临床基因扩增检验实验中，影响结果正确与否的重要因素，除了试剂盒质量外，其他还有：（ D ） A.人员素质 B.仪器设备状态 C.室内质控措施 D.以上全是18.核酸探针的标志性特征是：（A ） A.一小段已知序列的单链核酸 B.一小段未知序列的单链核酸 C.一小段未知序列的双链核酸 D.有同位素或非同位素标志物19.生物安全水平的级别共分为几个等级：（D ） A.1个 B.2个 C.3个 D.4个20.基因突变的实质是指：（A ） A.染色体上的DNA序列变化了 B.染色体上的DNA变成了蛋白质 C.染色体上的DNA变成了RNA D.染色体上的DNA高级结构发生了局部改变二、是非题1.处理PCR样本时，在没有生物安全柜的情况下，可用超净台工作。 （ X ）2.定量PCR与定性PCR测定原理最主要取得差别在于前者的测定在PCR的指数扩增期，而后者多为扩增平台期。 （Y ）3.新冠病毒核酸检测中，结果阴性不能排除病毒感染。 （ Y ）4.新冠病毒核酸结果判定时，若两个靶标检测结果处于灰区时，需严格按照试剂说明书进行复检及报告。 （Y ）5.PCR检测标本处理需在生物安全柜内进行，对具有潜在传染危险性的材料，必须在生物安全柜内开盖。 （ Y ）6.实验室检测项目无法参加室间质量评价时，可以用室内质控替代。 （ X ）7. NGS技术检测结果具有很高的准确性，不需要进行性能验证或性能确认。 （X ）8.扩增管没有盖好会造成PCR过程中反应液产生热蒸发，直接影响检测结果，但不会成为一个污染源。 （ X ）9.使用NGS技术可实现对临床样本中包括点突变（SNV）、插入缺失（Indel）、拷贝数变异（CNV）和结构变异（SV）等多种变异的识别。 （ Y ）10.肿瘤组织FFPE样本进行核酸检测前应由病理医师在显微镜下确认肿瘤细胞性质和含量。（ Y ）11.应当由经过适当培训的人员使用适当的个人防护装备和设备处理新型冠状病毒危险废弃物。 （ Y ）12.未经培养的感染性材料在采用可靠的方法灭活前进行的新型冠状病毒核酸提取，实验人员应采用生物安全三级实验室的个人防护。 （ Y ）
四、问答题（每题8分，共32分）1.有一实验室准备开展新冠病毒核酸检测，是否需要做性能验证？如果做，至少需要做哪些参数？该怎样做？需要做性能验证。1.精密度2.方法符合率3.检出限1.精密度:包括重复性和中间精密度。重复性对样本进行至少10次重复测定，阴阳性符合率≥90%，中间精密度每天检测3到4次，连续检测5天，阴阳性符合率大于等于90%。2.方法符合率：通过与参比方法进行比较。阴性样本5例，阳性包括弱阳性/低扩增不少10例。3.检出限：样本是定值标准物质，验证方法：定值标准物质样本梯度稀释至厂家声明的检出限浓度。重复测定5次或不同批内重复测定20次。判断，5次重复检测必须100%检出靶核酸，20检测必须至少18次检出靶核酸。样本要求：阳性样本可用质控品代替、应有弱阳性阴性样本应包含引起交叉反应的病原体 2.临床分子诊断实验室进行仪器设备的校准过程应注意的关键要素有哪些？答：1.实验室应建立设备的校准程序，相应程序中至少应包括需校准的设备、校准单位、校准周期、校准参数、校准参数符合相关检验目的和要求等内容。需内部比对、校准的辅助设备，实验室宜根据国家计量部门或生产厂商的规定制定比对或内部校准操作规程和要求。2.需对仪器的加样系统,温控系统,检测系统进行校准，3.需校准/检定仪器：测序仪，扩增仪，杂交仪，生物安全柜，高速冷冻离心机，恒温金属浴，移液器，温度计，温湿度计等4.频度：定期校准（国家计量部门或制造厂商要求进行）。有校准报告
核酸溶于水吗（网络配图 侵删）
3.感染性疾病的定量、定性检测，人基因组的基因型检测，对上述三类PCR检测的室内质控品浓度水平和型别硬做怎样要求？新冠病毒核酸检测的质量控制中，室内质控品应怎样设置？（1）定量测定：2个浓度质控品1个阴性 注意低值浓度质控品的选择与检测下限的关系。定性测定：1个阴性1个弱阳性和/或阳性质控品。人基因组：1个野生型1个突变型。人基因组：已知阴性和弱阳性质控品，无需在每批检测中包括所有突变类型，只需加入一个突变位点的质控品，但实验室最好有多个突变的质控品，并在日常检测中轮流使用（2）新冠病毒核酸检测的质量控制中，室内质控品应怎样设置？ 答：建议每批检测设立一个弱阳性质控、三个阴性质控（生理盐水），三份阴性质控随机放在临床样本中间。弱阳性质控测定为阳性，三份阴性质控全部测定为阴性，视为在控。反之，则为失控，不可发出报告，应分析原因，必要时重新检测样本。 4.有一基因扩增实验室在检测新冠病毒核酸标本时，以新冠病毒核酸（RNA）扩增片段的cDNA为标准品，检测结果除了试剂盒所带的cDNA标准品为阳性外，所有临床标本及阳性质控标本、阴性质控标本均为阴性，显然该次RT-PCR扩增检测存在问题，进一步查找原因，发现在血清标本的收集运送及保存中均严格按要求进行。那么，你能帮助该实验室分析一下检测失败的原因吗？阳性室内质控品出现假阴性失控的常见原因分析：1，核算提取中的随机误差，核酸提取中的丢失，有机溶剂的去除不彻底，标本中扩增抑制物的残留，所用耗材如离心管有PCR抑制物等。2，仪器的问题，如扩增仪孔间温度的不一致性，孔内温度与所示温度的不一致性等3，试剂的问题，如Taq酶或反转录酶的失活，探针的纯度及标记效率和核酸提取试剂的效率等。4，扩增产物的污染5，临床标本的核酸提取过程中发生的标本间的交叉污染6，喷枪等关键耗材污染7，试剂污染 、 8，仪器故障
五、论述题（18分）1.某一开展EBV病毒定性检测的临床实验室，参加盲样测试（包括三个阳性样本、两个阴性样本），该实验室做出的结果为5份样本全部阳性，工作人员将盲样全部阳性的结果确认后立即发出，第二天发现当天的室内质控结果也全部阳性，并且当天的阳性率明显增高，请问：1、 这样做是否正确？（2分）2、 应该怎样处理？（8分）3、 分析该情况产生的所有可能原因？（8分）答：1，不正确2，重新测定同一质控物；新开一瓶质控物；进行仪器维护或者更换试剂；重新校准；请工程师上门维护或者请教专家3,试剂问题；环境问题；仪器问题；操作问题、3，分析该情况产生的所有可能原因？（8分）①扩增产物的污染②核酸提取过程中发生样本间的交叉污染③喷枪的部分关键耗材污染④试剂污染⑤仪器故障2.分子检测实验室检测过程中，不同批号试剂的批间差异质检该怎样做？定性试剂：用于定性检验的试剂，选择阴性和弱阳性的样品进行试剂批号验证。定量试剂：5个旧批号试剂检测过的样品，覆盖测量区间(包括阴性、临界值、低值、中值和高值)，至少4个样品测量结果偏倚<?7.5%，其中阴性和临界值样品必须符合预期
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3.简述新冠病毒核酸检测中阴、阳室内质控品失控常见原因有哪些？阴性质控失控原因：①扩增产物的污染②核酸提取过程中发生样本间的交叉污染③喷枪的部分关键耗材污染④试剂污染⑤仪器故障 阳性质控失控原因：①核酸提取中随机误差：比如核酸提取中的丢失，有机溶剂的去除 不彻底，标本中扩增抑制物的残留等。②仪器的问题：如扩增仪孔间温度的不一致性，孔内温度与所示温度的不一致性等。③试剂问题：如Taq酶或反转录酶的失活，探针的纯度及标记效率和核酸提取试剂的效率。4.CPY2C19基因位点检测性能验证精密度 两种基因型（纯合子，杂合子），5*3,90%符合符合率20例临床样本，应包含各种基因多态性，与预期结果相比较，计算符合率 5.HBVDNA性能验证精密度：高低两个临床样本，1*2*3*5，计算CV符合要求正确度：收集20份临床标本，一次检测，计算两者偏倚。线性范围：高值样本稀释5个浓度，5*3检测，计算r和差异值。检测限：检测限附近，检测20次，18次结果在可接受范围内。 6.新冠核酸检测实验室清洁消毒实验室空气 实验室每次检测完毕，应进行紫外消毒至少30min工作台面/地面每天试验后使用0.5%~1%有效氯消毒液进行台面、地面消毒。垃圾桶及垃圾袋应喷洒0.5%~1%有效氯的消毒液生物安全柜 每天试验后用75%乙醇对生物安全柜进行擦拭转运容器 转运及存放标本的容器使用前后用75%乙醇进行擦拭或喷洒消毒核酸提取仪 每天实验后紫外消毒至少30min用75%乙醇对生物安全柜进行擦拭
核酸溶于水吗（网络配图 侵删）
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